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利用細胞和動物模式探討扁實檸檬萃取物對骨關節炎的緩和作用

為了解決mimaki日本的問題，作者顏郁文 這樣論述：

骨關節炎 (osteoarthritis, OA) 是關節內軟骨長期磨損、不當增生及滑膜液減少而導致的慢性疾病，最常發生於女性、肥胖、高齡等族群。研究指出當體重超過膝蓋所能負荷，即相當於身體脂量指數 body mass index (BMI)大於 30 時，會增加罹患膝關節炎的風險。肥胖的影響不只是外在身體重量會對膝蓋造成物理性負擔，體內慢性發炎更是對膝蓋關節影響距甚。扁實檸檬 (Citrus depressa Hayata) 是生長在日本沖繩和台灣的芸香科柑橘植物，其果皮中含有豐富的多甲氧基黃酮類化合物，具有抗發炎作用，可有效改善肥胖、高血糖、高血壓等慢性疾病。這裡動物實驗用 Spragu

e-Dawley 大鼠先進行 45% 高脂飲食 (每克 5.27 千大卡，45% 來自脂肪) 十一週的誘導，之後採取半月軟骨/十字韌帶傷害手術造成骨關節炎，再加以管餵 300、600、1500 mg/kg 扁實檸檬萃取物 (shiikuwasha extract, SE) 九週，依照其管餵劑量分成 SE300、SE600、SE1500 三個組別。餵食 SE 的大鼠可以減少體重的增加和緩解大鼠的關節疼痛。另外，SE 顯著降低了 SE1500 組大鼠血漿中的總三酸甘油酯和總膽固醇，但增加了 SE600 組大鼠血漿中的高密度脂蛋白膽固醇。同時，SE1500 組大鼠的血漿 tumor necrosis

factor alpha (TNF-α) 含量顯著降低。組織切片檢查結果證實SE 的處理改善了軟骨質變的問題。免疫組織化學染色檢查發現，SE 的處理向下調節了軟骨細胞 caspase 3 和phospho-Janus kinase 2 (p-JAK2) 的表現。利用被廣泛使用的清除自由基實驗方法：1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl (DPPH)、2,2'-azobis(3-ethylbenz-thiazoline-6-sulfonic acid (ABTS) 和還原能力測定法，SE 展現出良好的抗氧化特性。使用 2 μM MIA 刺激 SW1353 細胞建立 OA 的軟

骨細胞模式，SE 增加此細胞模式下的 SW1353 細胞存活率和減少細胞凋亡比率。SE 也可以改善 MIA 引起的 reactive oxygen species (ROS) 和 mitochondrial membrane potential (ΔΨm) 不良變化。TNF-α 和 interleukin-6 (IL-6) 在僅有 monosodium iodoacetate (MIA) 誘導的細胞培養液中是含量增加的，而第二型膠原蛋白的含量則是減少的。然而，SE 降低 TNF-α 和 IL-6 的含量，並增加第二型膠原蛋白的含量。甲苯胺藍染色顯示 SE 阻止了蛋白聚醣的流失。SE 處理有 M

IA 誘導的 SW1353 細胞時，其細胞的 cleaved-poly(ADP-ribose) polymerase (PARP)、cleaved-caspase 3、Bcl-2-associated X protein (BAX)、p-JAK2、JAK2、p-signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3) 和 STAT3 表現量都減少，表示細胞凋亡和 JAK2/STAT3 路徑參與了 SE 的作用。最後，這些結果證明 SE 可以調節軟骨細胞凋亡，以改善軟骨基質蛋白的流失和發炎反應。SE 也可以被認為是有潛力開發的 OA 營

養補充品。

發展臺灣香檬香氣特徵指紋及相關基因表現量初探

為了解決mimaki日本的問題，作者廖永瑀 這樣論述：

臺灣香檬(Citrus depressa Hayata)為原生於臺灣及日本沖繩之酸味小果柑橘，果實大小與外觀與常見的小果柑橘四季橘與酸橘相似易混淆。除種間辨識問題外，臺灣香檬其種內具有多樣性，由葉片形態特徵即顯見差異，但臺灣種原間的多樣性相關研究甚少。本研究利用葉片揮發性物質特徵，建構臺灣香檬與相似種間及種內的功能性輔助分類系統。試驗選用農業試驗分所嘉義分所之臺灣香檬蒐集種原，接穗來源包括嘉試所保留品系、花蓮、奧萬大，以及日本沖繩及一日本無籽品種，其他未知來源者作為測試組，以四季橘和酸橘建構之葉片氣味特徵指標。本試驗利用固相微萃取法萃取新鮮葉片揮發性物質，以氣相層析質譜儀分析，計算各化合物組

成比例作為統計分析數值。以葉片揮發性物質組成最高比例的二者作為氣味化學型特徵，臺灣香檬是Linalool/γ-Terpinene，四季橘為Linalool/β-Pinene，酸橘則是Linalool/Thymol methyl ether，三者利用集群分析結果亦可明確區分，其中臺灣香檬與酸橘的相似性較高。探討臺灣香檬種內多樣性，種內分群則可以Linalool/γ-terpinene比例、α-Terpineol的組成比例、p-Cymene 的組成比例、Thymol methyl ether的有無作為主要區分條件，經由以上條件可分為嘉試所品系、日本族群、臺灣採集族群(花蓮、奧萬大)三群。為確認季節

對葉片氣味特徵之影響，於3、7、9、12月各取樣進行分析，結果顯示季節雖影響部分葉片揮發性物質之相對組成比例，但並不影響所建立用於分群辨別的香氣特徵指標。根據次世代定序結果並參考前人研究，挑選出與β-Ocimene synthase、β-farnesene synthase、Limonene synthase、γ-Terpinene synthase、Linalool synthase、α-Terpineol synthase相關酵素，製作引子並進行qPCR，以基因相對表現量群集分析，所繪製之集群樹與以葉片氣味揮發性物質的集群樹種間分群大致相似，但無法良好對種內區分。本研究提出以葉片氣味特徵作

為分類鑑別參考依據，提供氣味應用特徵資料庫，了解臺灣香檬種原特色是臺灣香檬產業發展的重要基礎。