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以高分子奈米微粒自組裝技術開發成新型態messenger RNA (mRNA)禽流感疫苗

為了解決vim顯示m的問題，作者張正忠 這樣論述：

禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)對全世界的家禽產業及人類有巨大的威脅，因此需要有效的疫苗來防止大流行。現今的禽流感疫苗多由雞蛋培養禽流感病毒，再經由去活化作用而生成，然而面對快速傳佈的禽流感疫情時，以雞蛋生產疫苗無法快速反應病原變化，而且需在安全等級高的場所生產。訊息RNA (messenger RNA) 為細胞進行genomic DNA轉錄後的產物，可直接用於蛋白質生產，也不會有轉錄的DNA後模板殘留，以及對genomic DNA嵌插產生基因突變的安全性疑慮。目前已經有一些研究使用mRNA作為疫苗的抗原表現工具，例如Pfizer-BioNTech以及Mod

erna的COVID-19疫苗，證實mRNA疫苗具有啟動細胞免疫反應的效果。此外，mRNA會引起細胞Toll-Like Receptor (TLR)介導之免疫反應，本身即可提供作為一良好的疫苗佐劑。因此，本研究希望能以我們實驗室自行開發的高分子奈米載體遞送mRNA表現抗原，以驗證作為新型禽流感疫苗的可行性與動物免疫效果。在此研究中，我們以體外轉錄合成(in vitro transcription, IVT)系統，首先建構IVT反應所需要之基因模板，用於製備無自我複製型以及具有自我複製功能之mRNA，表現禽流感病毒的主要抗原，即血球凝集素(hemagglutinin, HA)。然後以不同結構修飾

的PEGylated polyaspartamide block copolymer遞送抗原血球凝集素mRNA，自組裝形成mRNA nano micelles vaccine，進行物化性質分析。並且比較在小鼠不同部位接種，刺激產生的免疫反應，包括體液免疫反應，測試免疫抗體效價以及血球凝集抑制效價。細胞性免疫反應，測試免疫小鼠脾臟細胞interferon- (IFN-)及interlukin-4 (IL-4)細胞激素表現，綜合評估將來開發成禽流感疫苗的潛力。結果顯示，我們所建構的IVT模板與技術，可以產製高純度與鏈長完整之短效型與長效型HA mRNA，在體外轉染家禽細胞後，也能產生完整HA抗

原蛋白。在體內動物試驗，證實以報導基因Luc2 mRNA注射小鼠肌肉，可以產生達9天以上之Luc2重組蛋白表現。在小鼠免疫試驗證實，產生達8倍以上之IgG抗體效價，並具有顯著血球凝集抑制效果，免疫小鼠脾臟細胞，具辨識AIV 抗原能力，分泌IFN-與IL-4細胞激素。本研究是第一個採用聚氨基酸奈米載體包覆AIV HA mRNA的設計，評估作為疫苗的效果，對於未來推廣mRNA vaccine作為禽流感或其他動物疾病預防疫苗，具有參考指標意義。

固相萃取法結合有機高分子整體管柱液相層析儀分析 水樣中的溴酸鹽

為了解決vim顯示m的問題，作者曾意文 這樣論述：

淨水處理可以確保飲用水水質和安全衛生之功用，但臭氧消毒含有溴化物的水，可能會產生消毒副產物–溴酸根；此外，有研究顯示溴酸根對人體具有致癌風險，目前在台灣飲用水中溴酸根的最高允許濃度為0.01 μg/mL，因此檢測水樣中的溴酸根含量極為重要。本研究利用自製的有機高分子整體管柱VIM-EDMA(1-Vinylimidazole-Ethylene glycol dimethacrylate)結合紫外光偵測器的液相層析方法進行檢測，為了檢測水樣中低濃度的溴酸根，在LC-UV測量之前使用固相萃取法進行預濃縮。本研究分別探討兩種管柱對溴酸根滯留時間的影響、流動相中氯化銨濃度、注入量等，以及對固相萃取條件

進行測試。在最佳化條件下，溴酸根的線性範圍在0.0025-0.075 μg/mL，線性相關係數大於0.9997，定量極限和偵測極限分別為0.0025 μg/mL和0.000625 μg/mL，同日間和異日間的精密度分別為0.2-3.7 %和0.2-1.7 %，準確度分別為96.32-102.45 %和98.04 -101.24 %。本實驗研究了一種高效的預濃縮方法，測得的萃取回收率約為66.84%。