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國立陽明大學 遺傳學研究所 周 成 功所指導 王維伶的 探討hTlk2結合蛋白hAtf5之特性 （2000），提出tlk-441mb關鍵因素是什麼，來自於TLK、ATF、細胞週期、酵母菌雜交、磷酸化、轉錄因子、免疫沉澱、生物資訊。
而第二篇論文國立陽明大學 遺傳學研究所 周成功所指導 黃阿梅的 人類蛋白激HsHPK的選殖與分析 （1999），提出因為有 蛋白激脢、人類、細胞週期、肝癌的重點而找出了 tlk-441mb的解答。
探討hTlk2結合蛋白hAtf5之特性
為了解決tlk-441mb 的問題，作者王維伶 這樣論述：
中文摘要 hTLK2（human Tousled-Like kinase 2），近來發現的一個人類serine/threonine protein kinase；屬於一保守性很高的protein kinase subfamily，在植物、線蟲、節肢動物及哺乳類間都有相似基因；阿拉伯芥的TSL（Tousled kinase）為此家族中目前研究得較清楚的基因，是調控花及葉子發育所必需的基因。雖然hTLK2廣泛地存在各種生物中，但對於其功能所知卻很少。 本實驗室之前的研究發現hTLk2的表現量在肝癌組織中多於旁邊正常的組
織；另外，hTlk2蛋白的表現受到細胞週期的調控，加上大量表現的hTlk2會造成細胞週期停頓在G2/M的現象；因而，推論hTLk2在調控細胞生長方面扮演重要的角色（52）；於是以Yeast Two-Hybrid的系統去篩選hTLK2的結合蛋白，以作為研究hTLK2功能的延續。 所篩選到的是一個原來N端不完整的基因，hATF5（human Activating Transcription Factor 5）。因此依DataBank的資訊，得到此基因的完整序列；hATF5 是ATF蛋白家族的一員，此家族成員與各種調節基因表現的功能有關。 延長
後的hAtf5在N端多出了100個胺基酸；這使其在PAGE上呈現double-band的情形，並增強了活化基因表現的能力，更不同於原來在細胞核內的均勻分佈，出現顆粒凝聚的現象 目前的結果顯示，hAtf5具有活化基因表現、抑制PKA活化CRE調控子的功能；另外，大量表現hAtf5時，與hTlk2相同，會將細胞週期停在G2/M，而這也暗示了hATF5與hTLK2在調節細胞生長上，扮演了重要的角色。最後，我們提出了一個hATF5與hTLK2關係的假設模式。
人類蛋白激HsHPK的選殖與分析
為了解決tlk-441mb 的問題，作者黃阿梅 這樣論述：
蛋白激在細胞生理作用上扮演非常重要的角色。本論文利用蛋白激保留性高的第七和第九激次區合成的degenerate primers作反轉錄聚合鏈反應，得到一個新的人類絲胺酸 /蘇胺酸磷酸激, HsHPK (Homo sapiens hepatoma protein kinase)。它在植物、線蟲、節肢動物及哺乳類間都有很高的保留性，尤其是激催化區有54%到94%的相似性。 以北方點墨分析法發現HsHPK在人類的組織中以睪丸、心臟及橫紋肌表現特別多，mRNA大小約為4-kb。同時，以肝癌病人的檢體分為肝癌組織和旁邊的非肝癌組織的RNA分別作反轉錄聚合鏈反應，結果發
現HsHPK表現在部份肝癌組織的量多於旁邊的正常肝組織。於293T細胞中大量表現含有flag-tagged HsHPK蛋白，經免疫沉澱後作體外激反應，發現其具有自我磷酸化的激活性，並可對外加的受質作磷酸化反應。 以GST-HsHPK融合蛋白質誘使老鼠產生抗體，並經細胞融合方法篩選出會特定辨認HsHPK的單株抗體5E9。利用5E9對細胞作間接免疫螢光染色，發現細胞內生性的HsHPK蛋白在細胞週期的不同分期有特殊的表現位置：在G1期，HsHPK蛋白大部份存在於細胞質而且有網狀結構的分佈；在S期，大部份的HsHPK蛋白聚集到細胞核外周圍 (peri-nuclear)，並與內質
網專一表現的蛋白Calnexin有共同的表現位置；在G2晚期，則進到細胞核內；而當細胞在進行有絲分裂時(M期)，HsHPK蛋白散佈於細胞中，並且有些特別聚集在spindle poles及在兩個子細胞間隔處(midbody)。以此單株抗體對不同的細胞週期的細胞萃取液作免疫沉澱，發現HsHPK蛋白質的量在不同細胞週期中並沒有很大的變化，但是在進行有絲分裂時(M期)，HsHPK蛋白質有明顯的位移的現象。進一步以各個細胞週期的免疫沉澱複合體作激反應，結果發現HsHPK蛋白質在M期的活性最強，而且對不同的受質有不同的選擇性。HsHPK蛋白質在M期對MBP、histone H1 和histone H3有
很強的活性，對histone H4及H2A幾乎沒有活性。而對於histone H2B 和casein則在所有不同的細胞週期皆有很高的活性。 為了要探討HsHPK在細胞週期可能扮演的調控角色，我們發現在293T細胞中大量表現HsHPK-GFP融合蛋白質會使較多(多出約20%)的細胞停留在G2/M期。而且這種情形是與HsHPK的激活性無關，顯示HsHPK可能經由其他與其結合的蛋白作用影響細胞週期的進行。也可以在裂殖酵母菌中得到類似結果。根據以上實驗結果，HsHPK蛋白質可能在細胞週期中特別是在G2或M期扮演重要角色。