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建立應用於犬遺傳性疾病－迷你雪納瑞犬慕勒氏管永存症及先天性肌強直症之高解析度融點曲線分析法

為了解決hydrometra中文的問題，作者郭睿佳 這樣論述：

動物體中,突變的基因可以顯性或隱性的形式遺傳至後代,導致遺傳性疾病的產生。分 子檢測是目前唯一可於臨床症狀發生前篩檢出遺傳性疾病的檢測方法,且已應用於人類。由 於物種的差異性,在犬要執行分子檢測則較為複雜,主因是不同突變可能於不同犬種中造成 相同遺傳疾病,因此目前一種分子檢測方式,只適用於單一或少數犬種的單項遺傳疾病。迷 你雪納瑞犬在美國及臺灣都是常見的犬種,在至今已被證實發生於該犬種的廿五種遺傳性疾 病中,只有少數幾項的致病基因突變已被確認,其中包含慕勒氏管永存症及先天性肌強直 症。目前此兩項疾病的分子檢測皆以限制性片段長度多態性 (restriction fragment length

polymorphism, RFLP) 的方式進行,即以聚合酶連鎖反應 (polymerase chain reaction, PCR) 合 併限制酶切割進行檢測;為縮短篩檢時程,本研究除了以RFLP進行臺灣地區迷你雪納瑞慕 勒氏管永存症及先天性肌強直症盛行率之調查外,更進一步發展以高解析度融點曲線分析法 (high resolution melting analysis, HRM analysis) 篩檢該兩項疾病的分子檢測方式。首先,由 各動物醫院收集來自 迷你雪納瑞的血液或口腔拭子樣本中萃取其基因體DNA,透過特定引 子進行PCR後,將其產物以特定限制酶進行消化,再以膠體電泳分析個體的基

因型,最後經 由定序確認分析結果。另一方面,本研究架構帶有野生型 (homozygous wild type, WT) 及突 變型 (homozygous mutant type, MT) 的質體,並混合兩種質體作為異形合子突變型 (heterozygous mutant type, HT),以進行HRM analysis條件優化,再透過與RFLP實驗及定序的 結果之比對,以評估HRM analysis篩檢之可行性。以RFLP檢測本研究所收集之106個迷你雪 納瑞樣本顯示,所有樣本均為先天性肌強直症WT,而其中有87個樣本為慕勒氏管永存症 WT,19個為慕勒氏管永存症HT;由所有樣本中隨機挑選

34個進行HRM analysis檢測,並將 以HRM analysis與RFLP篩檢結果相異之樣本,以定序確認作為最終判斷依據。根據以上分 子檢測結果判定,106個迷你雪納瑞犬樣本中,85個 (80.2%) 樣本為慕勒氏管永存症WT, 20個 (18.9 %) 為慕勒氏管永存症HT;1個 (0.9%) 為慕勒氏管永存症MT,但並未發現先天 性肌強直症之突變基因,而我們研發的高解析度融點曲線分析法可用於篩檢這兩項犬遺傳疾病。

β-defensins於犬發情週期及子宮內膜囊腫性增生在子宮內膜表現差異之分析

為了解決hydrometra中文的問題，作者蕭獻謙 這樣論述：

β-defensins (BD) 家族為小分子 (3~4 kD) 之陽離子胜肽，具有廣範圍之抗微生物作用。β-defensins主要來自於上皮細胞，參與先天與後天免疫反應。子宮內膜屬於先天粘膜免疫之一環。目前已有研究指出cBD1、cBD102及cBD103具有抗微生物的功能。於人類子宮的研究中，β-defensins會因為動情週期而有不同的表現高峰。然而，目前犬子宮內膜於正常動情週期間以及發生子宮蓄膿 (pyometra) 時，其β-defensins表現仍未明瞭。本研究目的是想了解β-defensins在犬子宮內膜中之表現與作用情形。本研究樣本來自經手術取下之犬子宮卵巢及胎盤組織，包括正常

動情週期以及子宮蓄膿之子宮，經半定量RT-PCR之結果顯示cBD1 mRNA於子宮懷孕期、hydrometra以及mucometra時，表現有顯著增加之情形。當子宮受到感染時，可見到cBD1表現向上調節，與子宮內膜厚度、腺體量多寡以及分泌物多寡有關。另一方面，本研究結果顯示犬子宮中β-defensins表現並非受到TLR2及TLR4所調控。總之，β-defensins可能於犬子宮免疫反應中扮演著重要的保護角色，且可能與腺體量以及分泌物多寡有關。