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嗜高溫放線菌Thermobifida fusca 所分泌 β-聚甘露醣酶之純化與性質探討

為了解決hq五金的問題，作者楊婷雅 這樣論述：

本研究以蒟蒻為基質，利用500 ml Hinton瓶培養嗜高溫放線菌Thermobifida fusca BCRC 19214生產胞外聚甘露醣酶 (β-mannanase)。經48小時培養，聚甘露醣酶活性達280.5 U/ml。經膠體過濾管柱和陰離子交換管柱進行純化，酵素之純化倍率為1680.94倍、回收率14.92%。純化的胞外聚甘露醣酶經膠體過濾與SDS-PAGE分析後，估算其分子量為44 kDa。進一步利用LC-MS/MS 進行蛋白質鑑定，結果發現其內部胺基酸序列與Thermobifida fusca YX 的聚甘露醣酶胺基酸序列有高度的相似性。在酵素性質方面，本實驗純化聚甘露醣酶之最

適溫度及pH 值分別為50℃和8.0。就金屬離子對純化的酵素而言， Hg2+ 會明顯抑制聚甘露醣酶的活性。10 mM β-mercaptoethanol、sodium azide 會明顯抑制聚甘露醣酶活性。在有機溶劑方面，10~20% 之醇類皆會抑制聚甘露醣酶活性。本研究並利用蛋白質鑑定過程中所得到之蛋白質胺基酸片段，利用PCR反應，放大出胞外聚甘露醣酶活性之構造基因，並選殖至pETDuet-1載體中，於大腸桿菌E.coli BL21 (DE3) 中進行表現。並已在大腸桿菌中成功表現。在酵素性質方面，大腸桿菌轉型株生產純化之聚甘露醣酶之最適溫度及pH 值分別為80℃和8.0。就金屬離子對純化的

酵素而言，Hg2+ 會明顯抑制聚甘露醣酶的活性。10 mM Dithiothreitol 、 sodium dodecyl sulfate、sodium azide會明顯抑制聚甘露醣酶活性。在有機溶劑方面，10~20% 之醇類皆會抑制聚甘露醣酶活性。另一方面，我們探討經由聚甘露醣酶水解蒟蒻及刺槐豆膠，由結果顯示本實驗純化聚甘露醣酶可有效分解蒟蒻及刺槐豆膠。