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大同大學 生物工程學系(所) 陳志成所指導 陳建元的 基因重組Pichia pastoris生產β-glucosidase與酵素濃度提升之研究 （2017），提出味精英文縮寫關鍵因素是什麼，來自於酵素濃度提升、β-葡萄糖苷酶、畢氏酵母。
而第二篇論文國立中興大學 分子生物學研究所 許文輝所指導 管宜家的 噬菌體 P1201之 ant4 基因在Corynebacterium glutamicum NCHU 87078 之生理角色及Proteus mirabilis BCRC 10725 之離胺酸消旋酵素之生化特性 （2011），提出因為有 基因體、載體的重點而找出了 味精英文縮寫的解答。
基因重組Pichia pastoris生產β-glucosidase與酵素濃度提升之研究
為了解決味精英文縮寫 的問題，作者陳建元 這樣論述：
纖維素酶為將木質纖維材料分解成還原糖並製成生質能源材料的關鍵酵素，其中β-glucosidase在纖維素酶中扮演最重要的角色。本研究中使用基因工程菌株Pichia pastoris mut 92生產β-glucosidase，並利用在培養基中額外添加黑糖及在饋料培養基中以味精作為氮源促進細胞生長、並提升蛋白質分泌及β-glucosidase之產量。在培養約220 hr後，添加30 g/L黑糖的培養基測得結果最好，其菌體乾重(CDW)、總蛋白質量與p-Nitrophenyl-β-D-glucopyranoside (pNPG)活性分別為67.7 g/L，0.49 mg/mL及4.89 pNPG
U/mL，分別為未添加黑糖之培養基的1.17，1.51及1.45倍。醱酵液離心後利用孔徑分別為2 μm及50 kDa之純化過濾卡匣對上清液進行過濾，其最佳pNPG活性濃縮6倍，酵素純度提升3倍與酵素回收率為63.2 %。最適條件測試中得到β-glucosidase最適條件為pH 5.0與55 ℃，並在最適反應條件下， 核能所提供的cellulase與濃縮β-glucosidase以體積比9：1混和液的filter paper (FP)活性為69.8 FPU/mL，較同樣條件下單純使用cellulase的FP活性提升1.22倍，所以展現其在工業使用上的潛能。
噬菌體 P1201之 ant4 基因在Corynebacterium glutamicum NCHU 87078 之生理角色及Proteus mirabilis BCRC 10725 之離胺酸消旋酵素之生化特性
為了解決味精英文縮寫 的問題，作者管宜家 這樣論述：
(1)利用 Corynebacterium glutamicum NCHU 87078 進行味精醱酵時，有時會發生敗槽，前人研究中由敗槽醱酵液內分離出溶裂性噬菌體 corynephage P1201，其基因體中的 ant4 基因之生理角色，仍無文獻報導。Ant4 具有兩個 domain，N 端 bro-N domain 屬於 bro family，可能為結合 DNA 的 domain，而 C 端則比對到 prophage 的 kilA-C domain。從 C. glutamicum NCHU 87078 中選殖出 ant4 基因、bro-N domain 及 kilA-C domain D
NA 片段，分別將三個 DNA 片段構築於表現載體上，進行大量表現並純化蛋白，發現 ant4 於 C. glutamicum 或 E. col 菌體內表現時，會轉譯出兩種 N 端有差異的蛋白質，並造成 C. glutamicum 和 E. coli 停止生長。以 realtime-PCR 及 Western blot 偵測 corynephage P1201 感染 C. glutamicum NCHU 87078 時 ant4 的表現情形，發現 ant4 屬於病毒感染的早期基因。利用核酸微矩陣 (microarray) 分析表現 ant4 基因的 C. glutamicum NCHU 8707
8，發現有 218 個基因和對照組有顯著差異。其中與離子輸送相關之基因在ant4基因表現時，表現量上升，而大部分與能量產生及轉譯有關之基因則表現量下降。進一步以 realtime-PCR 分析確認，發現 RamA 所調控之酒精代謝及醋酸代謝之相關基因 （aceA及aceB） 表現量下降，與支鏈型胺基酸 (ilvB) 及脂肪酸合成相關的基因 (fas-IA及fas-IB) 之表現量也下降，推測前述基因表現之下降，可能與 Ant4 抑制 C. glutamicum NCHU 87078 的生長有關。利用 Pull-down assay 及免疫沉澱法分析蛋白質之交互作用，發現 Ant4 會與 C.
glutamicum NCHU 87078 的轉錄調控因子： SugR 、 RamA 、 RamB 及 LexA 產生交互作用，並確認 Ant4 蛋白 C 端的 kilA-C domain 為參與蛋白質交互作用的主要區域，而 N 端的bro-N domain 為與 DNA 結合的主要區域。利用 EMSA 分析結果也顯示， Ant4 會促進 RamA 及 LexA 與其專一性 DNA 結合的能力。以原子力顯微鏡觀察，發現 Ant4 單獨存在時會非專一性的結合在整條 aceA-P DNA 片段上。但是在 RamA 轉錄調控因子存在下，Ant4 會藉由與 RamA 的相互作用形成一個 Ant4/Ra
mA/aceA-P 的聚合結構，結合在 RamA 的啟動子上，使 aceA 基因無法進行轉錄。綜上所述，Ant4 可能扮演著 corynephage P1201 感染宿主後調控代謝基因表現的廣泛性轉錄調節者 （global transcriptional regulator）。(2)從Proteus mirabilis BCRC 10725中選殖一完整的ORF並將其命名為lyr，此基因全長為1224 bp，可以轉譯出預估分子量為45 kDa的蛋白質。將lyr基因於E. coli BL21(DE3)中表現，純化帶有His6-tag的Lyr酵素，可催化lysine 的消旋反應，比活性為2828 ±
97 U/mg；此酵素對arginine 也具有催化的活性，其比活性為568 ±28 U/mg，但對於其他胺基酸則不具有消旋作用。Lyr的最適反應pH及溫度分別為8.0-9.0 及50 ℃，其活性不受離子的影響。將Lyr以hydroxylamine處理後會失去lysine racemase活性，再添加pyridoxal 5`-phosphate (PLP) 後可恢復部份活性，證實其反應需要PLP。將Lyr第394個胺基酸的serine做定點突變，發現S394Y、 S394N、 S394C及S394T 對arginine的轉換率可提升約1.5-1.8倍，由結果可知S394在Lyr對lysine
及arginine之基質選擇性上扮演著重要角色。